神经营养因子受体络氨酸激酶（NTRK）基因融合突变广泛分布于不同类型实体瘤中，是泛肿瘤靶向治疗的重要靶点。近年来，针对这一靶点的研究备受临床关注，也取得了诸多突破。

 

近日，由北京协和医院牵头的一项全国大型多中心临床研究——《为实体瘤NTRK融合突变检测建立优化的pan-TRK免疫组化染色方案和cut-off值：基于一项中国多中心横断面研究》（Establishing optimized staining protocol and cutoff values of pan-TRK immunohistochemistry for detecting NTRK fusions in solid tumors:A Chinese multicenter cross-sectional study）（以下简称“研究”）的摘要在2024年美国临床肿瘤学会（ASCO）官网重磅发布。

 

 

研究表明，利用扩增染色方案和推荐的cut-off值，pan-TRK免疫组化（IHC）检测显示出高灵敏度，同时保持了良好的特异性和准确性，提高了对实体瘤NTRK融合突变的筛选和富集效率。该研究为IHC检测用于实体瘤NTRK融合突变阳性患者的筛查提供了关键的数据支持，并有望为中国乃至全球的NTRK融合突变IHC检测建立新的标准。

 

 

NTRK基因融合突变已被确定为成人和儿童泛实体瘤患者的致癌驱动因素，虽然在实体瘤的整体发病率仅为0.3%^[1]，但考虑到实体瘤患者的庞大数量，NTRK融合突变阳性患者的绝对数量并不在少数。并且，NTRK融合突变阳性患者可以在靶向治疗中显著获益，数据显示中国人群的客观缓解率达81%^[2]。鉴于NTRK融合突变的罕见性，治疗的关键在于如何以经济高效的方式筛选出阳性患者。

 

目前，NTRK融合突变的检测方法主要包括免疫组织化学法（IHC）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、荧光原位杂交（FISH）和二代测序（NGS）方法学。相较而言，IHC方法检测NTRK融合具有高灵敏度、低成本和易开展等特点，更适用于筛查富集潜在阳性患者。早在2019年，就有相关产品（VENTANA pan-TRK(EPR17341)检测试剂）获得国家药品监督管理局(NMPA)批准上市。ESMO（欧洲肿瘤内科学会）指南中推荐使用IHC方法筛查富集，再使用NGS确认的策略寻找阳性患者^[3]。《中国实体瘤NTRK融合基因临床诊疗专家共识》也指出：pan-TRK IHC可以作为NTRK融合突变发生率较低、常规条件下不推荐NGS DNA panel方法的癌种初筛方法；也可以作为NGS检测方法的复核手段。

 

NTRK融合突变广泛分布于不同实体肿瘤类型中，融合伴侣的多样性以及免疫组化染色模式的复杂性给pan-TRK IHC检测和判读标准的建立带来极大的障碍。目前国内外尚无成熟可靠的判读标准，临床实践中应用的IHC染色方案和cut-off值均不理想，导致IHC检测筛查性能有限，这些不足都限制了pan-TRK IHC检测在临床的广泛应用。该研究旨在优化IHC染色方案并重新定义cut-off值，提高pan-TRK IHC检测方法筛查NTRK融合突变的效果。

 

 

该研究从中国12家医院回顾性收集了126例NTRK+和162例NTRK-实体瘤样本（在目前国内外所有已发表的相关研究中，本研究阳性样本量最多），这些样本先前均已经NGS和/或FISH检测确认。所有样本均使用VENTANA pan-TRK IHC试剂检测，并分别采用两种不同的IHC染色方案：1）VENTANA pan-TRK IHC试剂说明书中推荐的传统方法；2）扩增方法，即在传统方法基础上增加扩增步骤以增强染色。根据试剂厂商的说明对经IHC染色的样本进行判读，并分析结果以计算cut-off值。基于计算的和文献报道的cutoff值分别计算灵敏度、特异性、准确性、阳性预测值（PPV）和阴性预测值（NPV）。

 

研究结果与意义

 

该研究126例NTRK+样本中，包含25种融合伴侣类型和23种肿瘤类型。IHC检测显示有35例NTRK-样本未染色，253例样本着色（126NTRK+/127NTRK-）。肿瘤细胞染色主要位于细胞质和细胞核位置（132例细胞质阳性，105例细胞质和核阳性）。由于膜染色的样本有限，仅定义了细胞质和细胞核染色的cut-off值。为了增强pan-TRK IHC检测在NTRK融合突变筛查中的敏感性和可操作性，研究对直接统计计算的cut-off值进行了调整，并推荐在临床实践中使用以下cut-off值：

 

 

推荐cut-off值的敏感性和特异性均高于此前文献报道的cut-off值（≥1%）：敏感性和特异性分别为94.44%vs.87.9%和82.1%vs.81.1%^[4]。

 

 

研究结果表明，利用扩增染色方案和推荐的cut-off值，pan-TRK IHC检测显示出高灵敏度，同时保持了良好的特异性和准确性，提高了对实体瘤NTRK融合突变的筛选和富集效率。该研究为IHC检测用于实体瘤NTRK融合突变阳性患者的筛查提供了关键的数据支持，基于该研究建立的pan-TRK IHC染色判读标准为中国及全球其它国家临床实践的开展提供了可靠的参考标准。

 

参考文献：

 

1、《中国实体瘤NTRK融合基因临床诊疗专家共识》

 

2、*2023ESMO数据更新：Shun lu et al.2023 ESMO.666P

 

3、C.Marchio，M.Scaltriti，M.Ladanyi.，et al.Annals of Oncology 30:1417–1427，2019.

 

4、Solomon，James P.，et al.NTRK fusion detection across multiple assays and 33，997 cases:diagnostic implications and pitfalls.Modern pathology:an official journal of the United States and Canadian Academy of Pathology，Inc(2019).